SPERM HY-LITER

SPERM HY-LITER^TM

Este un test de evidentiere a spermei umane, bazat pe detectarea spermatozoizilor la microscop prin fluorescenta, in scopul demascarii unui atac sexual.

Acreditari si standarde criminalistice: ISO 17025; NY-DOH; AABB; CLIA

Kit-ul HY-LITER detecteaza si identifica sperma in lumina UV.

Identificarea microscopica a spermei prin fluorescenta

• Detecteaza capete de spermatozoizi umani, identificarea se realizeaza cu Alexa 488 pentru capetele de sperma, iar pentru nucleele celulare se utilizeaza un filtru compatibil DAPI (atat nucleele din spermatozoizi cat si cele epiteliale). Sensibilitatea este de un singur cap de spermatozoid;
• Nu exista interactiuni cu alte fluide sau materiale, fiind specific spermei umane;
• Identificarea este usoara si se face vizual;
• Timpul de efectuare al testului este de 100 de minute, din care doar 10 minute reprezinta timp efectiv de lucru.

Solutii oferite in kit:

• Solutie de fixare – sticla cu dop alb;
• Solutie de preparare a probei – sticla cu dop galben (necesita aditia unei solutii de DTT – reactiv Cleland – agent reducator, preparat dupa o reteta data mai jos);
• Solutie de imobilizare – sticla cu dop rosu;
• Solutie de patare a capetelor de spermatozoizi – sticla cu dop verde;
• Mediu de depunere – sticla cu dop albastru;
• Solutie tampon stoc 10 x (de 10 ori concentratia necesara la spalare) pentru spalare – sticla patrata de 250 ml (se dilueaza inainte de utilizare).

Solutii preparate de utilizator

• Solutia tampon de spalare 1x (la concentratia de spalare): se prepara din solutia tampon stoc 10 x (concentrata) prin diluare 1:10 cu apa dublu distilata intr-o biureta;
• Solutia de preparare a probelor + DTT (reactiv Cleland/Reductacril): se prepara acest amestec in fiecare zi, pentru utilizare zilnica, sau inainte de fiecare utilizare. Amestecul este de 1:1, sau chiar mai mult pentru solutia DTT, la alegerea laborantului.
• Reteta DTT 1M

Se prepara urmatoarele solutii:

• solutia tampon de spalare (dupa modul descris anterior);
• amestecul din solutia de preparare a probelor si solutia de DTT.

B. Etapa de patare in cinci pasi:

     1. Fixarea

Se adauga din solutia de fixare (dop alb) in fiecare fereastra a placutei sau pe suprafata placutei fara ferestre. Se incubeaza pentru 10 minute.

Clatirea: se utilizeaza biureta pentru a clati usor fereasta de pe placuta cu aproximativ 2-3 ml solutie de spalare 1x. Nu se recomanda clatirea cu jet puternic, nefiind necesara. Dupa spalare fereastra se sterge cu un servetel din hartie.

     2. Prepararea probei

In solutia din sticluta cu dop galben se adauga si solutia de DTT. Se pipeteaza din amestec in fereastra placutei in functie de dimensiunea acesteia, dupa cum urmeaza:

Clatirea se face conform cu pct. 1.

 3. Imobilizarea

Se adauga din solutia de imobilizare/blocare (dop rosu) picaturi in conformitate cu tabelul de la pct. 1. Se incubeaza pentru 30 de minute si apoi se clateste conform pct.1.

     4. Patarea

Se adauga solutia de patare a capetelor de spermatozoizi (dop verde) in fiecare fereastra conform tabelului de la pct. 1. Se incubeaza pentru 30 minute si apoi se clateste conform pct. 1.

     5. Montarea (depunerea)

Se adauga o picatura din mediul de depunere (dop albastru) in fiecare fereastra sau trei picaturi la placuta intreaga.

Se ataseaza apoi lamela de protectie deasupra ferestrelor sau placutei si se sterge excesul de mediu de depunere. Acesta se va semi-intari in 20 de minute, la temperatura camerei.

Se pot vizualiza si sunt stabile cateva zile.

C. Vizualizarea/inregistrarea

Pentru a vizualiza aveti nevoie de un microscop cu fluorescenta si filtrele adecvate. Nucleele celulelor pot fi vizualizate cu un filtru compatibil DAPI (celule epiteliale si sperma).

Pentru a vizualiza doar sperma este necesar un filtru compatibil Alexa 488 (FITC).